[生命科学] 生物基础实验之PCR验证
2023-04-18 12:38:13 时间
生物基础实验之PCR验证
实验步骤一
在离心管加入7.5μL Master Mix 溶液,5.5μL 蒸馏水,引物各0.5μL μL 以及1μL 模板(各种植物的DNA)。
实验步骤二
1 95℃ 3min 升温
2 95℃ 变性 30 s
3 58℃ 或者 60 ℃ 退火 30s
4 72℃ 延伸 45s
5 72℃ 延伸 45s 结束
选择 Files, 点击program,点击新建。然后点击Header, 如果是做PCR的话,Heaterd Lid 温度选择105℃。其他不用管。 图片实际的翻译时间设置可能和文字步骤不一致,以文字步骤为准。
实验步骤三 配胶
在等待PCR结果的过程中,先进行配胶。称量0.3g琼脂糖,加入20ml TAE 溶液 ,混合后放入微波炉中2min后溶液呈透明状后加入1μmol/L的核酸染料。(实验过程必须戴手套)。 琼脂浓度根据DNA片段大小来决定,片段大,浓度低,1000bp浓度约为1.5%。片段小,浓度高,200bp浓度约为2-3%。放入凝胶槽中。根据需要,选择不同大小的插板如下图所示,插板有大有小。批量大的实验可用大插板。 等待15分钟凝固后转移到电泳仪器中。
实验步骤四 电泳
取PCR反应好的DNA 7.0μL 插入点样孔中,最右侧放入Marker5000(视DNA长度选择不同的Marker)。电压U=140V, 反应时间=15分钟。然后开始电泳啦!
实验步骤五 跑胶
电泳15分钟结束后,取出凝胶后小心移入电泳仪中进行读取。
点击左上角照相,再点击左下脚照相机图标,即开始分析,得到电泳结果。根据DNA MAKER 对照DNA片段大小。到此实验就结束啦!
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