人-喉癌癌组织细胞悬液制备流程
2023-03-31 10:30:18 时间
注 | 以下操作指南中涉及的消化酶以及实验方法仅供参考,实际应用过程中请根据具体情况进行细节上的调整。
背景介绍
喉癌分原发性和继发性两种。原发性喉癌指原发部位在喉部的肿瘤,以鳞状细胞癌最为常见。继发性喉癌指来自其他部位的恶性肿瘤转移至喉部,较为少见。喉癌症状主要为声嘶、呼吸困难、咳嗽、吞咽困难、颈部淋巴结转移等。肿瘤细胞与其同源正常组织相比,细胞间的粘着性降低,故肿瘤细胞在体内容易分散和转移。我们使用美天妮公司的人肿瘤组织分离试剂盒对肠道肿瘤进行解离。
喉癌组织示意图
实验试剂及耗材
实验步骤
- 准备肿瘤解离试剂盒的酶混合液,将100 µL的H酶、500 µL的R酶和25 µL的A酶加入到4.4mL的的 RPMI 1640培养基中。
- 组织切成直径2-4 mm的小块。
- 将组织转移到含有酶液的温和MACS C管中(冰上)。
- 拧紧C管,并将其倒挂在gentle MACS Dissociator的套管上。
- 运行 gentleMACS 中的 h_Tumor_01程序。
- 程序终止后,将C管从gentleMACS解离器上拆下。
- 使用MACSmix试管旋转器在37℃下连续旋转培养样品30 min。
- 将C管倒挂在gentle MACS Dissociator的套筒上,并运行gentle MACS解离器的程序h_Tumor_02,随后将C管置于MACSmix试管旋转器上在37 ℃下连续旋转培养样品30 min。
- 程序终止后,将C管从gentleMACS解离器上拆下。
- 重悬细胞沉淀,使用置于50 mL离心管上的70 μm滤膜过滤。
- 用20 mL RPMI 1640冲洗滤膜,300 xg离心7 min。完全吸出上清液。
- 使用适当体积的缓冲液重悬细胞,使用台盼蓝血细胞计数仪分析细胞数量和活性。
结果及注意事项
细胞量:94万左右,活率91%以上,结团率15%
注:喉癌组织在取样的时候,要尽量避免掺入食道软骨或黏膜等组织,这些组织存在会使细胞悬液的杂质量增多,以及影响酶解效果
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